Paracoccidioides brasiliensis infection in dogs from Western Brazilian Amazon / Infecção por Paracoccidioides brasiliensis em cães da Amazônia Ocidental Brasileira

The objective of the study was to evaluate Paracoccidioides brasiliensis infection in urban dogs from the municipality of Monte Negro, Rondonia, Western Brazilian Amazon. The serum samples (n=126) were analyzed by indirect ELISA and the immunodiffusion test using P. brasiliensis gp43 and exoantigen as antigens, respectively. A positivity of 54.8% was observed only in the ELISA test and no statistical difference was observed in the seroprevalence in relation to age or sex. This is the first paracoccidioidomycosis survey carried out with dogs from the Western Brazilian Amazon. The higher positivity rates of P. brasiliensis infection observed in this study suggest that veterinarians must be alert to detect new cases of natural disease in dogs living in paracoccidioidomycosis endemic areas.

O objetivo deste estudo foi avaliar a infecção por Paracoccidioides brasiliensis em cães urbanos do município de Monte Negro, Rondônia, Amazônia Ocidental Brasileira. As amostras de soro (n=126) foram analisadas por meio dos testes de ELISA indireto e imunodifusão utilizando gp43 de P. brasiliensis e exoantígeno como antígenos, respectivamente. Uma positividade de 54,8% foi observada apé isso mesmoenas no teste de ELISA e nenhuma diferença estatística foi observada na soroprevalência em relação ao sexo ou à idade. Este é o primeiro estudo epidemiológico de paracoccidioidomicose realizado com cães da Amazônia Ocidental Brasileira. A alta positividade de infecção por P. brasiliensis observada neste estudo sugere que os veterinários devem estar atentos para detectar a doença natural em cães de áreas endêmicas para paracoccidioidomicose.

Reavaliação e proposta de um protocolo de sorologia para paracoccidioidomicose / Serodiagnostic protocol for PCM

A necessidade de implantação de uma nova conduta sorodiagnóstica para Paracoccidiomicose (PCM), na região Norte do Paraná, surgiu pela falta de correlação entre as condições clínicas dos pacientes com exame ou anatomopatológico positivo para P. brasiliensis, com os resultados de reação de fixação de complemento utilizando antígeno polissacarídico comercial Pimenta Abreu (AgPA). A reavaliação foi realizada utilizando-se 43 soros com requisição de sorologia para PCM, negativos por fixação de complemento com AgPA. Os testes utilizados foram imunodifusão radial, Fixação de Complemento, Elisa e Western Blotting, utilizando exoantígeno de 7 dias (Ag7d de P. brasiliensis e glicoproteína de 43KDa de P. Brasiliensis. Não foi observada nenhuma reação positiva com AgPA mesmo em pacientes diagnosticados por exames anatomopatológicos e ou micológicos AgPA, enquanto que a positividade pós-reação de fixação de complemento utilizando Ag7d foi de 37,2% e por imunodifusão radial dupla de 25,5%. Foi realizada também análise desses soros pelo ensaio: ELISA clássico com o Ag7D, ELISA captura com a glicoproteína de 43KDa (Gp43) de P. brasiliensis e “Western blotting” com Ag7d, obtendo-se 81,4%. Os resultados aqui obtidos mostram claramente a necessidade de controle de qualidade na produção e padronização de antígeno como reagente para imunodiagnóstico.

Caracterizaçäo parcial de receptores solúveis E presentes em soros de pacientes com hanseníase / Partial characterization of E-soluble receptor (Rs) present in Hansen's disease (HD) patients sera

Os receptores solúveis para eritrócitos de carneiro (E) podem ser encontrados sob forma solúvel em soros humanos, e em níveis elevados em patologias associadas com a imunossupressäo. No presente trabalho, concordando com os dados da literatura observamos nível de receptores solúveis para E (Rs) em níveis elevados em soros de pacientes com hanseníase. A partir desses soros, isolamos Rs de peso moleculares distintos, Rs1 (= 58 KDa) e Rs2 (acima de 150 KDa), por cromatografia por gel filtraçäo (Sephadex G-200) e por troca iônica (DEAE celulose), concordando com os resultados obtidos anteriormente com soros de pacientes urêmicos ou neoplásicos. As fraçöes positivas detectadas, por ensaio imunoenzimático, quando analisadas por eletroforese em gel de poliacrilamida e por "western blotting" utilizando soro anti-Rs, demonstraram apenas uma banda de Rs1 e uma ou duas bandas para Rs2. Para verificar se os mesmos apresentavam alguma relaçäo com CD2, molécula de superfície de linfócito T que interage com E, e com CD58, ligante natural de CD2, foi realizado ensaio imunoenzimático utilizando anticorpos monoclonais respectivos. Os resultados obtidos sugerem a inexistência de relaçäo de Rs1 e Rs2 com a molécula CD2 ou CD58

Efeito de Rs1 e Rs2 de soros de pacientes com hanseníase na cultura de linfócitos / The effect of seric Rs1 and Rs2 from Hansen's disease (HD) patients in lymphocytes cultures

No presente trabalho foi analisado efeito de receptores solúveis para E de pesos moleculares distintos (Rs1 e Rs2), presentes em níveis elevados em soros de pacientes com hanseníase, na cultura de linfócitos estimulados com fitohemaglutinina (PHA). Foram realizadas culturas de linfócitos de pacientes com hanseníase na forma lepromatosa (LV), na forma tuberculóide (LT) e linfócitos de indivíduos normais (LN), tratados com fraçöes de Rs1 e Rs2 adsorvidas com E (para adsorver Rs) e com hemácias de carneiro tripsinizadas (ET). Foi utilizado meio RPMI, contendo 10 porcento de soro bovino fetal, penicilina, estreptomicina, herpes a 37§C, com 5 porcento de tensäo de CO2, durante 72 horas. Os resultados obtidos demonstraram maior resposta proliferativa nas fraçöes Rs1 e Rs2 absorvidas com E, em relaçäo às fraçöes absorvidas com ET. Adicionalmente foram realizadas cultura de linfócitos com Rs1 e Rs2 previamente purificados, observando-se também inibiçäo na resposta linfoproliferativa à PHA. Esses resultados sugerem que tanto Rs1 como Rs2 apresentam atividade inibitória na resposta linfoproliferativa à PHA, tanto com linfócitos de pacientes com hanseníase na forma lepromatosa ou tuberculóide, bem como linfócitos de doadores normais

Obtençäo e análise de soro heterólogo anti-receptor de linfócitos T humano para eritrócitos de carneiro / Obtention and analysis of heterologous anti-human T lymphocyte receptors for sheep erythrocytes serum

Neste trabalho foi obtido soro anti-receptor de linfócitos de carneiro (E) por imunizaçäo de carneiro com eritrócitos autólogos sensibilizados com receptores solubilizados de membranas de linfócitos humanos. A análise desse soro anti-receptor solúvel (anti-Rs) demonstrou a capacidade de inibir a formaçäo da rosácea, de identificar linfócitos T por imunofluorescência indireta, de aglutinar complexo E sensibilizado com receptor solúvel, confirmando os dados da literatura. Considerando que esse soro anti-Rs interage com moléculas de peso molecular aproximado de 58 Kd (Rs1) e acima de 150 Kd (Rs2), foi analisado o efeito bloqueador desse soro anti-Rs na interaçäo de Rs1 e Rs2 a E. Adicionalmente IgG anti-Rs foi purificada através de cromatografia de afinidade utilizando coluna de Sepharose Proteína A e analisada em cultura de linfócitos. Essa IgG anti-Rs purificada, nas concentraçöes de 60 e 120 µg induziu resposta proliferativa de linfócitos humanos normais "in vitro"